碱性蛋白酶酶活测定原理 福林法原理
碱性蛋白酶在碱性条件下,可以催化酪蛋白水解生成酪氨酸。酪氨酸为含有酚羟基的氨基酸,可与福林试剂(Folin)(磷钨酸与磷钼酸的混合物)发生福林酚反应。(福林酚反应:福林试剂在碱性条件下其不稳定,容易定量地被酚类化合物还原,生成钨蓝和钼蓝的混合物,而呈现出不同深浅的蓝色。)利用比色法即可测定酪氨酸的生成量,用碱性蛋白酶在单位时间内水解酪蛋白产生的酪氨酸的量来表示酶活力,以此计算其酶活力。
ClpP的保守特性和相当大的蛋白水解活性使其成为双功能抗生素蛋白降解剂的理想起点,具有降解革兰氏阳性和革兰氏阴原体的多种必需细胞质蛋白的能力。相比之下,Lon和FtsH已被确定为较弱的蛋白水解机器,因此利用这些蛋白酶可能不是实现功能性、结构化POI的有效降解的选择。HtrA蛋白酶的周质位置及其作为不依赖ATP的蛋白酶的特身份使其成为另一个选择。近发现的用于ClpP和HtrA的新型蛋白酶激活剂为将这些蛋白酶与已知配体结合提供了一个理想的起点
假定降解主要在生理pH下发生,所以金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶将处于其功能能力。在局部酸性环境中,半胱氨酸蛋白酶(组织蛋白酶B、H、L和S)和天冬氨酸蛋白酶(组织蛋白酶D)在酸性pH下作用于细胞外时具有活性,尽管在胶原片段的吞噬作用之后,它们的主要作用可能在细胞内的溶酶体内。然而,它们的相对作用却随着环境的不同而有所不同,并且它们还能够协同作用于消化胶原蛋白。尽管一些过程通过原纤维片段的吞噬发生,但通常认为,细胞内消化不是吸收过程中的关键事件。
针对蛋白质酶解的蛋白质酶有很多种,如,木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶,通过多种来源蛋白酶的协同效应,能进一步提高原料蛋白的利用率和成分。同时通过控制酶解时间、控制水解度、肽的分子量分布、是蛋白酶酶解技术加工过程中需要重点关注关键点。酶解后处理过程也很重要,因为生产原料或者生产过程中会有苦味、腥味或者颜色不美观,一般可通过如美拉德反应、活性碳脱苦、等物理方法进行风味提升和脱色脱腥。
单的蛋白质和蛋白酶一般不反应。
适宜条件下,有水存在时,蛋白酶能够催化蛋白质的水解,即蛋白质和水反应生成氨基酸,而蛋白酶在反应前后总体保持不变。
木瓜蛋白酶是番木瓜未成熟乳汁中富含的一种巯基蛋白酶,是一种低特蛋白水解酶,可水解和赖氨酸的羧基端,同时木瓜蛋白酶中还含有一定的溶菌酶和纤维素酶,因此也兼具溶菌和纤维素水解活性。与菠萝蛋白酶相似,木瓜蛋白酶相比于动物源性中性蛋白酶,其活性条件范围更为宽泛,同时水解底物专一性较低,能够很好的动物源性消化酶对难消化吸收的食物成分进行精细化的消化吸收。
碱性果胶酶能有效分解去除果胶质及其它共生物杂质,是一种比较理想的生物精练和煮练酶,被广泛应用于棉及其交织或混纺纤维、纱线和织物的各种前处理工序,还可用于麻类脱胶。
酶活定义
在50℃,pH9条件下,1分钟使聚半乳糖醛酸裂解产生1μ的不饱和聚半乳糖醛酸的酶量。
酶活构成
碱性果胶酶(主要包括原果胶酶,裂解酶和果胶水解酶)
酶活力
碱性果胶酶(固体)>7000U/g
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